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Bradford法蛋白浓度测定试剂盒

英文名称	Bradford Protein Assay Kit
储存条件	开封使用后请密封保存，本试剂盒自订购之日起九个月内有效。
单位	盒

bradford蛋白定量试剂盒产品内容：

组成	包装（2500微孔)	保存
5×G250染色液	100ml	2-8℃
PBS稀释液	30ml	2-8℃
蛋白标准(5mg/ml BSA)	1ml	-20℃

产品简介：

考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（Imax），由465nm变为595nm，在一定的浓度范围内，测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM，但受略高浓度的去垢剂影响，需确保SDS的浓度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用索莱宝生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。

操作说明：

一．微孔酶标仪法 1. 完全溶解蛋白标准品，取10ul，稀释至250ul ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。 2. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml 5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。 3. 将标准品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。 4. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。 5. 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。 6. 用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。 7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。 二．分光光度计法 如无酶标仪，染色反应可在离心管中进行，反应液混匀后加入比色皿中，使用分光光度计测定吸光值。步骤如下：1. 取八支（或者更多）干净的10ml离心管，标记上号。 2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。 3. 5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取10ml 5×G250染色液，加入40ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4. 按下表加入试剂(以每孔5ml计，多余的用来清洗比色皿)

离心管号	1	2	3	4	5	6	7（样品管1）	8（样品管2）	9（样品管3）
标准蛋白BSA	0ul	100ul	200ul	300ul	400ul	500ul	500ul适当稀释的样品1	500ul适当稀释的样品2	……
PBS	500ul	400ul	300ul	200ul	100ul	0ul	0ul	0ul	0ul
1XG250染色液	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml	5ml

5. 反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性，可每间隔2分钟加一管染色液，每间隔2分钟测一管OD值。如下表：

离心管号	1	2	3	4	5	6	7	8	……
加染色液（分钟）	0	2	4	6	8	10	12	14	……
测OD值	3	5	7	9	11	13	15	17	……

此图为伯乐酶标仪680，单波长，570nm测得。室温反应三分钟

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